BCA assay

1

Bedenk hoeveel samples je wilt analyseren en met welke buffer de ijklijn gemaakt moet worden. Deel een plaat en de ijklijnen met een ander groepje.

2

Maak een calibratie curve met OVA (in duplo op de plaat) – denk aan het volgende:

• Voeg 50 μL van elk ijklijnpunt toe per well van een platbodem 96-well plaat.
• Maak zelf verdunningen en eindig met 0 mg/mL als onderste waarde van de ijklijn. Kijk bij de achtergrondinformatie voor advies over de eiwitconcentraties van de ijklijn. Max. concentratie 2 mg/ml.
• De ijklijn mag uit 8 punten bestaan.

De calibratiecurve met OVA moet in verschillende oplossingen/buffers worden bereid: denk daarbij aan de buffer(s) waarin de samples zijn opgelost.

Pipetteer vervolgens je te meten samples op de plaat en vul indien nodig aan tot 50 µL. 

3

Bereid het BCA reagens voor, bestaande uit oplossingen A en B in een verhouding (25:1). Reken eerst uit hoeveel reagens je nodig hebt.

Voeg aan elke well 150 μL reagens toe.

4

Schud de 96-well plaat voorzichtig om het reagens met de samples te mixen.

5

Dek de plaat af en incubeer 30 minuten op 37˚C.

6

Laat de samples afkoelen tot kamertemperatuur

7

Meet de absorbantie op 562 nm met de Tecan infinite M1000.